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保定实时荧光定量pcr仪批发询价咨询「在线咨询」

发布时间:2022-09-07 23:09:00        作者:精塞玛







PCR的三个反应步骤反复进行,使DNA扩增量呈指数上升。反应终的DNA扩增量可用y=(1+X)n计算。Y代表DNA片段扩增后的拷贝数,X表示平均每次的扩增效率,n代表循环次数。平均扩增效率的理论值为100%,实际反应初期,靶序列DNA片段的增加呈指数形式,随着PCR产物的逐渐积累,被扩增的DNA片段不再呈指数增加,而进入线性增长期或静止期,即出现“停滞效应”,使平均效率达不到理论值


PCR仪的分类:

按扩增目的和检测标准来分,PCR仪有普通PCR仪,梯度PCR仪,原位PCR,实时荧光定量PCR仪等几类。

其中,普通PCR仪一次PCR扩增只能运行一个特定退火温度;梯度PCR仪可以设置一系列不同的退火温度条件(通常12种温度梯度),单次扩增效率更高;原位PCR能够保持细胞或组织的完整性,使PCR反应体系渗透到组织和细胞中,更有利于探讨靶DNA与细胞之间的关系;实时荧光定量PCR仪是在普通PCR仪设计基础上增加荧光信号采集系统和计算机分析处理系统,形成了具有荧光定量功能的PCR仪器。您在选择PCR仪时,根据自己的检测需求、采购预算等因素选择合适的种类即可。




PCR的早设想 核酸研究已有100多年的历史,本世纪60年代末、70年代初人们致力于研究基因的体外分离技术,Korana于1971年早提出核酸体外扩增的设想:“经过DNA变性,与合适的引物杂交,用DNA聚合酶延伸引物,并不断重复该过程便可tRNA基因”。

  PCR的实现

  1985年美国PE-Cetus公司人类遗传研究室的Mullis 等发明了具有划时代意义的聚合酶链反应。其原理类似于DNA的体内,只是在试管中给DNA的体外合成提供以致一种合适的条件---摸板DNA ,寡核苷酸引物,DNA聚合酶,合适的缓冲体系,DNA变性、复性及延伸的温度与时间。




TaqMan荧光探针:PCR扩增时在加入一对引物的同时加入一个特异性的荧光探针,该探针为一寡核苷酸,两端分别标记一个报告荧光基团和一个淬灭荧光基团。探针完整时,报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收;PCR扩增时,Taq酶的5'-3'外切酶活性将探针酶切降解,使报告荧光基团和淬灭荧光基团分离,从而荧光监测系统可接收到荧光信号,即每扩增一条DNA链,就有一个荧光分子形成,实现了荧光信号的累积与PCR产物形成完全同步。而新型TaqMan-MGB探针使该技术既可进行基因定量分析,又可分析基因突变(SNP),有望成为基因诊断和个体化用药分析的技术平台。


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